2.加樣反應：樣本檢測孔每孔分別加已稀釋樣本血清100ul。同時設陰性、陽性及空白對照各1孔，取陰性、陽性對照各100ul分別加入反應孔內，空白對照孔僅加入100ul樣本稀釋液（5號液）。37℃避光反應30分鐘后甩去孔內液體，每孔加洗滌液（2號液）1滴，立即用蒸餾水注滿，靜置30秒后甩去，再直接用蒸餾水洗滌四次，每次均需靜置30秒，zui后一次甩去，拍干。

3.加酶反應：除空白對照孔外其余每孔加酶結合物（1號液）2滴，37℃避光反應30分鐘后甩去孔內液體，如上洗滌，拍干。

4.顯色反應：加底物（3號液）和顯色劑（4號液）各1滴，混勻，37℃下避光顯色10分鐘。加終止液（6號液）1滴，混勻，終止反應（加終止液后藍色會變為黃色）。

結果判斷

1.肉眼觀察：陰性對照接近無色，陽性對照呈明顯黃色，表示試驗有效。待檢孔接近無色表示該標本為陰性，待檢孔呈明顯黃色表示該標本為陽性。

2.儀器判斷：以空白對照調零用酶標儀于450nm（620nm作參比波長）讀取O.D值，待檢孔O.D值大于陰性對照2.1倍者為陽性。當陰性對照O.D值低于0.07時按0.07計算。

注意事項

1.試劑盒在2-8℃下保存，有效期六個月。每次取出時先平衡至室溫后使用。滴瓶每次用后一定要將蓋擰緊，各瓶蓋之間切不可混用。各試劑盒之間不可混用。

2.洗滌時將蒸餾水加滿各孔，每次停放三十秒鐘，甩去孔內液體。禁用自來水等其它水源。

3.為提高試驗的可比性建議使用儀器判讀結果，并對陰性對照測復孔以減少誤差。

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