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利用PCR熒光探針法測非洲豬瘟ASFV的試劑盒

【廣州健侖生物科技有限公司】

非洲豬瘟（African Swine fever，ASF）是由非洲豬瘟病毒（African Swine fever virus，ASFV）感染家豬和各種野豬（非洲野豬、歐洲野豬等）引起一種急性、出血性、烈性傳染病。世界動物衛生組織（OIE）將其列為法定報告動物疫病，該病也是我國重點防范的一類動物疫情。其特征是發病過程短，最急性和急性感染死亡率高達100%，臨床表現為發熱（達40~42℃），心跳加快，呼吸困難，部分咳嗽，眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物，皮膚發紺，淋巴結、腎、胃腸粘膜明顯出血，非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似，只能依靠實驗室監測確診。 

ASFV病原簡介：

非洲豬瘟病毒是非洲豬瘟科非洲豬瘟病毒屬的重要成員，病毒有些特性類似虹彩病毒科和痘病毒科。病毒粒子的直徑為175－215納米，呈20面體對稱，有囊膜?；蚪M為雙股線狀DNA，大小170－190kb。在豬體內，非洲豬瘟病毒可在幾種類型的細胞漿中，尤其是網狀內皮細胞和單核巨噬細胞中復制。該病毒可在鈍緣蜱中增殖，并使其成為主要的傳播媒介。

本病毒能從被感染豬之血液、組織液、內臟，及其他排泄物中證實出來，低溫暗室內存在血液中之病毒可生存六年，室溫中可活數周，加熱被感染病毒的血液55℃30分鐘或60℃10分鐘，病毒將被破壞，許多脂溶劑和消毒劑可以將其破壞。

易感動物

豬與野豬對本病毒都系自然易感性的，各品種及各不同年齡之豬群同樣是易感性，夢特哥馬利氏等（Montgomery）于1921年曾設法試驗白鼠、天竺鼠、兔、貓、犬、山羊、綿羊、牛、馬、鴿等動物，都未被感染成功，但是偉力合（Velho）于1956年報告，他曾盲目通過兔子26代后攻毒豬照樣致死。

ASFV傳播媒介：

非洲和西班牙半島有幾種軟蜱是ASFV的貯藏宿主和媒介。美洲等地分布廣泛的很多其他蜱種也可傳播ASFV。一般認為，ASFV傳入無病地區都與來自國際機場和港口的未經煮過的感染豬制品或殘羹喂豬有關，或由于接觸了感染的家豬的污染物，胎兒，糞便，病豬組織，并喂了污染飼料而發生。發病率和死亡率最高可達100%。世界動物衛生組織將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。1921年肯尼亞首次報道發生非洲豬瘟疫情，該病于上世紀60年代傳入歐洲，70年代傳入南美洲，2007傳入高加索地區和俄羅斯。2017年以來，俄羅斯遠東地區發生數起非洲豬瘟疫情。2018年我國沈陽市沈北新區沈北街道（新城子）五五社區發現*例病毒。   該病現主要在非洲、中東歐和高加索地區流行。病毒在我國已有出現。健康豬與患病豬或污染物直接接觸是非洲豬瘟最主要的傳播途徑，豬被帶毒的蜱等媒介昆蟲叮咬也存在感染非洲豬瘟的可能性。 [50]

2018年之前，中國沒有非洲豬瘟。分子流行病學研究表明：傳入中國的非洲豬瘟病毒屬基因Ⅱ型，與格魯吉亞、俄羅斯、波蘭公布的毒株全基因組序列同源性為99.95%左右。

“通常非洲豬瘟跨國境傳入的途徑主要有四類：一是生豬及其產品國際貿易和，二是國際旅客攜帶的豬肉及其產品，三是國際運輸工具上的餐廚剩余物，四是野豬遷徙。”

中國已查明疫源的68起家豬疫情，傳播途徑主要有三種：一是生豬及其產品跨區域調運，占全部疫情約19%；二是餐廚剩余物喂豬，占全部疫情約34%；三是人員與車輛帶毒傳播，這是當前疫情擴散的最主要方式，占全部疫情約46%。

ASFV發病機理：

ASFV可經過口和上呼吸道系統進入豬體，在鼻咽部或是扁桃體發生感染，病毒迅速蔓延到下頜淋巴結，通過淋巴和血液遍布全身。強毒感染時細胞變化很快，在呈現明顯的刺激反應前，細胞都已死亡。弱毒感染時，刺激反應很容易觀察到，細胞核變大，普遍發生有絲分裂。發病率通常在40%-85%之間，死亡率因感染的毒株不同而有所差異。高致病性毒株死亡率可高達90-100%；中等致病性毒株在成年動物的死亡率在20%-40%之間，在幼年動物的死亡率在70%-80%之間；低致病性毒株死亡率在10%-30%之間。

ASFV實驗室診斷

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該項目在前期篩選20余萬條RAA引物的基礎上，總結相關規律并建立了全新的RAA設計方案，并構建了RAA引物設計模型。

通過這一模型，可快速進行特異性RAA引物的設計，并可以*避免非特異性擴增

突出優點：

1.解決困擾基因擴增行業多年的污染問題

2.現場：隨時隨地進行基因擴增（世界

，突破傳統的檢測方法）
3.即時：現場檢測結果
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5.快速：基因擴增5-15分鐘，全程30分鐘完成。（傳統檢測基因擴增時間：2小時）

此項技術已經做過很多次試驗，對非洲豬瘟檢測有可行性。我們期待可以推薦到農業部做實驗，認證一下實驗過程和結果。近年來國家對農業政策的注重程度和肉制品民生問題，非洲豬瘟檢測大力推廣也將會是勢在必行。

利用PCR熒光探針法測非洲豬瘟ASFV的試劑盒

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